尊龙凯时生物科技有限公司提供的永生化小鼠肝枯否细胞(Kupffer细胞)是一种可靠的体外模型,广泛应用于肝脏炎症反应及相关疾病的病理机制研究。以下是我们基于该产品的一项应用案例分享。
一、实验方法
我们从尊龙凯时生物科技有限公司获取的永生化小鼠肝枯否细胞,采用含有10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基,在37°C、5% CO2的培养箱中进行培养。当细胞生长至80-90%汇合时,使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液进行处理,然后按照1:4的比例进行传代。
实验所用药物以DMSO为溶剂,配制成不同浓度的储存液,并在-20°C条件下保存。细胞被接种于96孔板中,每孔约接种5×103个细胞。24小时后,移除培养基,加入不同浓度药物的新鲜培养基。药物处理分为对照组(仅含DMSO)和实验组(多种药物浓度),每组设置6个复孔。
经过24小时的药物处理后,向每孔中添加20µL的5mg/mL MTT溶液,在培养箱中继续培养4小时。随后去除MTT溶液,每个孔中添加150µL DMSO,震荡10分钟以溶解甲臜晶体。最后,使用酶标仪在570nm波长下测量吸光度(OD值)。完成药物处理后,收集细胞培养上清液,并按照ELISA试剂盒的说明书进行TNF-α和IL-6的含量检测。数据分析使用GraphPad Prism软件,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),并进行Tukey's多重比较检验。所有数据以平均值±标准差(SD)表示,P值小于0.05被视为有统计学意义。每个实验至少重复三次以确保结果的可靠性。
二、实验结果
我们的实验结果显示,在与对照组相比的实验组中,药物处理的永生化小鼠肝枯否细胞表现出显著降低的细胞活力(P<0.05)及增加的TNF-α和IL-6水平(P<0.05),这表明该药物可能具有抗炎作用。
三、结语
尊龙凯时生物科技有限公司的永生化小鼠肝枯否细胞为肝脏炎症的研究提供了一个稳定且可靠的实验工具。我们的应用案例展示了该产品在药物筛选与炎症机制研究中的重要作用。期待与广大科研工作者携手,推动肝脏疾病研究领域的发展。