尊龙凯时大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞 FLS

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM+10%FBS+1%双抗

传代方法：首次传代建议1:2，2天更换培养基。请注意使用无菌的离心管收集培养基，以便于后续的对比培养。如对比效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，应尽快将其培养至良好状态，再用完全培养液灌满细胞瓶，并封好瓶口，这种操作是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后在超净台进行严格无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5%CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况并拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张）。接收后3天的照片将作为售后依据，若不提供照片则默认收到的状态良好。传代后，建议一瓶使用原培养基，另一瓶使用自配基，以便进行对比培养，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

若细胞汇合度未超过80%，将瓶中完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5%CO2环境继续培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，随即在显微镜下观察细胞状态；若细胞大部分出现圆形并脱落，迅速拿回操作台，用轻敲的方法促使细胞脱落，再加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS洗涤一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆，加入5ml完全培养基终止消化后，轻轻吹打使细胞脱落，再转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐中，需在-80℃下保存至少24小时再转移。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞从冻存管移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，置于37℃、5%CO2环境中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因粘附不牢而脱落。这是正常现象。如细胞脱离较多，可按以下方法处理：将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应，再进行离心、弃上清并重悬。按照1:2比例传代并补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可重发情况：

• 运输过程中发生细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液的情况。
• 收到后48小时内出现细胞污染问题，提供真实实验结果后可重发。
• 常温发货细胞静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时内细胞存活率低于标准，需提供细胞状态照片。
• 如细胞在48小时内未开封且出现污染，亦可申请重发。
• 若在7天内提出活性问题，并提供相关照片及实验结果，经验证后可重发。
• 收到细胞当天以及2-3天内拍照记录，若超过3天未告知，视为产品合格。若在4-7天内出现问题，须提供前3天的照片及操作步骤，以便于技术人员判定责任。

2）不予重发情况：

• 客户自身原因造成的细胞污染。
• 客户操作不当导致细胞状态不良。
• 使用非推荐培养体系的影响。
• 未提供细胞培养前3天的照片。
• 细胞收到后2天内未告知情况。
• 具体情况视现场情况而定。

对于<强>尊龙凯时品牌的细胞产品，确保遵循以上培训和售后指南，以便获得最佳的实验效果。