尊龙凯时带来古典猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书。本产品通用名称为古典猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒，英文名称为Classical Swine Fever Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)。包装规格为50T/盒。

产品用途

本试剂盒专为古典猪瘟病毒检测而设计，可辅助临床诊断古典猪瘟病毒感染，但不用于确诊。

原理

该试剂盒针对古典猪瘟病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针。在反应体系中含有古典猪瘟病毒基因组模板时，PCR反应将释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测相应通道的信号，实现对检测结果的定性分析。

试剂盒组成

试剂盒包括以下成分（50T/盒）：

• PRRSV RT-PCR反应液 875 μL × 1管
• PRRSV混合酶液 125 μL × 1管
• PRRSV阳性对照 40μL × 1管
• PRRSV阴性对照 40μL × 1管
• 说明书 1份

储存条件及有效期

本产品需避光储存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

1. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样本，置于离心管中待检。
2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取样20g，加少量灭菌PBS，研磨至糊状后，用PBS稀释成乳剂，8000rpm 4℃离心10min，取上清检测。
3. 避免样本间交叉污染。
4. 样本收集后可立即检测，若不能立即检测可在2～8℃冷藏；长期保存应冻存于-80℃以下。

检验方法

1. 试剂准备
从冰箱取出试剂盒，取出所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心。核算实验所需反应数量，并根据反应体系计算所需试剂量。
RT-PCR反应液175 μL，混合酶25 μL。
在无菌离心管中加入试剂，混匀并瞬时离心，按20μL/管分装至PCR反应管。

2. 样本准备
用QIAGEN或Roche RNA提取试剂盒提取RNA，按说明书操作。

3. 加样
在制备好的PCR管中分别加入5μL待测样本RNA，终体积25μL，盖好反应盖混匀并瞬时低速离心，转移到PCR仪器。阳性和阴性对照管则各加5μL对照品。

4. PCR扩增
将处理好的PCR管放入PCR仪样品槽中，并记录顺序。设置仪器的核酸扩增参数进行PCR扩增。

参考值（参考范围）

1. 对试剂盒有效性进行判定：

• 阳性对照：S型扩增曲线或Ct值≤35。
• 阴性对照：Ct值＞38或无Ct值。

• 阳性：Ct值≤35或有明显指数增长期。
• 可疑：Ct值在35～38范围内，建议重复检测。
• 阴性：Ct值＞38或无Ct值。

检验结果的解释

使用FAM通道进行检测，结果为：

• FAM+：标本中检出猪蓝耳病病毒。
• -：标本中未检出猪蓝耳病病毒。

注意事项

1. 实验室管理应遵循基因扩增检验相关规范。
2. 样本处理应在0-4℃条件下操作。
3. 使用的器具应避免交叉污染，并及时清洁工作台。
4. 吸取反应液时避免气泡，盖紧PCR反应管。
5. 所有试剂在使用前应充分融化混匀。
6. 各区域物品不得交叉使用，实验后需进行消毒。
7. 实验完成后，所有试剂应按照相关要求妥善处理。

通过尊龙凯时的古典猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒，确保您的检测工作高效准确，助力公共健康安全。