在进行克隆载体构建时,大家常常面临哪些挑战呢?选择合适的限制性内切酶往往令人困扰;酶切与克隆步骤复杂且耗时;单克隆菌株常常缺乏条带,频繁重复的实验让人沮丧。记得曾有位学长在构建载体时,每次都需要筛选数十个单克隆,以期找到阳性菌落,但结果却常常令人失望。学长曾希望能有一种方法确保所有生长的单克隆都是重组成功的。酶切克隆和无缝克隆的原理依赖于连接酶,通过碱基互补的粘性末端使载体与片段配对,并在连接酶的作用下形成完整的质粒。然而,这些方法易出现较高的假阳性率,连接酶在连接载体与片段时,可能会导致载体自连。为解决这一问题,尊龙凯时生物推出了一款基于重组酶原理的同源重组试剂盒,完美避免了克隆过程中的假阳性现象,获得的单菌落全部为阳性,甚至可以不需菌落筛选直接送测。
产品简介
尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning技术是一种快速、高效、简便的DNA定向克隆技术,可以将目的基因的PCR产物直接克隆至任意载体的任意位点。CloneUFO® OneStepCloning试剂盒以T4噬菌体某基因获得的重组酶为核心,提供了一种全新的重组克隆解决方案。此试剂盒包含重组反应所需的缓冲液和重组酶UvsXase,能兼容常规酶切和PCR反应体系。克隆载体的酶切产物或PCR产物以及目的基因的PCR产物,无需进行DNA纯化,便可直接用于重组克隆,从而极大简化了实验步骤。通过按比例混合扩增的目的基因PCR产物和线性化载体,在UvsXase的催化下,仅需反应30分钟即可完成转化,实现定向克隆,阳性率可达95%以上。
产品特点
1. **位点无限制同源重组**:可根据需求自由设计重组位点,无需受限于限制性内切酶。
2. **重组高效快速**:快速重组连接,反应时间仅需30分钟,反应条件温和。
3. **重组酶介导**:UvsXase提供高特异性重组,避免了载体自连,确保阳性率大于95%。
实验案例
在实验中,将PCR产物胶回收后,使用尊龙凯时的ATG#C101与其他品牌同类产品对回收片段和同一载体进行重组。转化大肠杆菌后,进行单菌落PCR验证,结果显示,使用ATG#C101重组后的单菌落数量适中,但其阳性率明显优于竞品。
产品信息
若您希望在生物医疗领域简化克隆流程,提高阳性率,尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning试剂盒无疑是您的理想选择。通过高效的重组技术,助您在科研道路上取得更多突破。