细胞焦亡(Pyroptosis)是一种由炎症信号触发的程序性细胞死亡方式,其显著特点包括细胞膜的穿孔、细胞的肿胀与破裂。这一过程依赖于炎性半胱天冬酶,主要为caspase-1、-4、-5和-11,同时伴随大量促炎因子的释放,例如IL-1β和IL-18。与凋亡及坏死等其他细胞死亡机制相比,细胞焦亡在形态学特征、发生机制和调控方式上均表现出显著的不同。
尊龙凯时推出的BBcellProbe®细胞焦亡检测试剂盒采用比色光度法,能够检测细胞焦亡相关蛋白酶Caspase的活性及细胞质膜的破裂情况。该试剂盒的原理在于,caspase-1/4/5能催化相应底物产生黄色的pNA,pNA在405 nm附近有明显的吸收,因而可以通过测定吸光度来评估细胞焦亡相关蛋白酶的活性。此外,还可以使用酶标仪、荧光酶标仪以及适合检测容量不超过100 μl的分光光度计、荧光光度计进行实验,符合细胞培养的需求。
尊龙凯时的BBcellProbe®系列还提供荧光标记的焦亡检测试剂盒,包括AFC、R110和AMC等。相比于分光光度法,荧光法的灵敏度更高,因此在具备荧光检测条件的情况下,推荐使用荧光检测试剂盒;如果没有荧光检测条件,则可以选择尊龙凯时的比色法细胞焦亡检测试剂盒,但需确保样品中细胞焦亡程度足够高。
- 酶标仪/荧光酶标仪
- 分光光度计/荧光光度计
- 激光共聚焦显微镜
- 流式细胞仪
- 细胞
- 裂解缓冲液和检测缓冲液的配制。
- 样品处理:
- 收集细胞,离心2-3分钟,谨慎吸取培养基,并尽可能吸干,收集细胞。
- 用冷PBS洗涤细胞两次,洗涤后尽量吸干上清。
- 在细胞中加入50 μl冷的裂解缓冲液,进行高速涡旋振荡15秒。
- 将样品置于冰上持续振荡25-40分钟。
- 在4℃、10000×g条件下离心10分钟。
- 将上清转移至预冷的干净离心管中,并置于冰上或-80℃冰箱中保存待用。
- 对处理后的上清液进行蛋白定量。
- 进行焦亡检测。
通过尊龙凯时的BBcellProbe®细胞焦亡检测试剂盒,您可以方便地评估细胞焦亡情况,从而为相关研究提供强有力的支持与保障。